Amidazė (AMD)
Fermentai:Yra makromolekuliniai biologiniai katalizatoriai, dauguma fermentų yra baltymai
Amidazė:Katalizuoja įvairių endogeninių ir svetimų alifatinių ir aromatinių amidų hidrolizę, perkeldami acilo grupę į vandenį ir susidarydami laisvosios rūgštys bei amoniakas. Hidroksamo rūgštys ir kitos organinės rūgštys plačiai naudojamos kaip vaistai, nes jos yra augimo faktorių, antibiotikų ir navikų inhibitorių sudedamoji dalis. Amidazes galima suskirstyti į R tipo ir S tipo acilazes pagal katalizatoriaus stereoselektyvumą.
Be amidų hidrolizės katalizavimo, amidazė taip pat gali katalizuoti acilo pernašos reakcijas, esant kosubstratams, tokiems kaip hidroksilaminas.
Skirtingų šaltinių amidazės pasižymi skirtingu substrato specifiškumu: kai kurios iš jų gali hidrolizuoti tik aromatinius amidus, kai kurios – tik alifatinius amidus, o kai kurios – α- arba ω-amino amidus. Dauguma aminų pasižymi geru kataliziniu aktyvumu tik acikliniams arba paprastiems aromatiniams amidams, tačiau sudėtingiems aromatiniams junginiams heterocikliniai amidai, ypač amidai su orto pakaitais, paprastai yra mažo aktyvumo (tik keli fermentai pasižymi geresniu kataliziniu poveikiu).
Katalizinis mechanizmas:
| Fermentai | Produkto kodas | Produkto kodas |
| Fermentų milteliai | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | 19 amidazių rinkinys po 50 mg 19 vienetų * 50 mg / vienetas arba kitas kiekis |
| Atrankos rinkinys (SynKit) | ES-AMD-1900 | 19 amidazių rinkinys po 1 mg 19 vienetų * 1 mg / vienetas |
★ Didelis substrato specifiškumas.
★ Stiprus chiralinis selektyvumas.
★ Didelis konversijos efektyvumas.
★ Mažiau šalutinių produktų.
★ Lengvos reakcijos sąlygos.
★ Draugiškas aplinkai.
➢ Fermentų patikra turėtų būti atliekama konkretiems substratams dėl substrato specifiškumo ir reikia gauti fermentą, kuris katalizuoja tikslinį substratą su geriausiu kataliziniu poveikiu.
➢ Niekada nelieskite ekstremaliomis sąlygomis, tokiomis kaip: aukšta temperatūra, aukštas/žemas pH ir didelės koncentracijos organiniai tirpikliai.
➢ Paprastai reakcijos sistemoje turėtų būti substratas, buferinis tirpalas (optimalus fermento reakcijos pH). Acilo pernašos reakcijos sistemoje turėtų būti kosubstratų, tokių kaip hidroksilaminas.
➢ AMD į reakcijos sistemą, užtikrinant optimalų pH ir temperatūrą, turėtų būti įpilamas paskutinis.
➢ Visų AMD rūšių optimalios reakcijos sąlygos yra įvairios, todėl kiekvieną iš jų reikėtų toliau tirti atskirai.
1 pavyzdys(1):
Hidrolizės aktyvumas skirtingiems amido substratams
| Substratas | Konkreti veikla μmols min-1mg-1 | Substratas | Konkreti veikla μmols min-1mg-1 |
| Acetamidas | 3.8 | ο-OH benzamidas | 1.4 |
| Propionamidas | 3.9 | p-OH benzamidas | 1.2 |
| Laktamidas | 12.8 | ο-NH2benzamidas | 1.0 |
| Butiramidas | 11.9 | p-NH2benzamidas | 0,8 |
| Izobutiramidas | 26.2 | ο-Toluamidas | 0,3 |
| Pentanamidas | 22.0 | p-Toluamidas | 8.1 |
| Heksanamidas | 6.4 | Nikotinamidas | 1.7 |
| Cikloheksanamidas | 19,5 | Izonikotinamidas | 1.8 |
| Akrilamidas | 10.2 | Pikolinamidas | 2.1 |
| Metakrilamidas | 3.5 | 3-fenilpropionamidas | 7.6 |
| Prolinamidas | 3.4 | Indol-3-acetamidas | 1.9 |
| Benzamidas | 6.8 |
Reakcija buvo atlikta 50 mM natrio fosfato buferiniame tirpale, pH 7,5, 70 °C temperatūroje.
| Amidai | Hidroksilaminas | Hidrazinas |
| Acetamidas | 8.4 | 1.4 |
| Propionamidas | 18.4 | 3.0 |
| Izobutiramidas | 25,0 | 22.7 |
| Benzamidas | 9.2 | 6.1 |
Reakcija buvo atlikta 50 mM natrio fosfato buferiniame tirpale, pH 7,5, 70 °C temperatūroje.
Susijusi reagento koncentracija: amidai – 100 mM (benzamidas – 10 mM); hidroksilaminas ir hidrazinas – 400 mM; fermentas – 0,9 μM.
2 pavyzdys(2):
3 pavyzdys(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S. ir kt. Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR ir kt. Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400–1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM ir kt. Bioorganinė chemija, 2017, Prieinama internete 7.
